Разработка иммуноферментной тест-системы для выявления антител против вируса ЧМЖЖ в сыворотках крови мелкого рогатого скота методом одного разведения

УДК:  619:616.98:578.833.31:616-076

Автор статьи:  Сухоруков А.В.

Соавторы:  Мамадалиев С.М., Кошеметов Ж.К.

Место работы автора:  ТОО Бицентр

Название журнала:  Биотехнология. Теория и практика

Год выпуска:  2010

Номер журнала:  2

Страницы:  с.72-78

Резюме на казахском языке:  Мақалада МКҚЖ вирусына қарсы антиденелерді анықтау үшін ИФСөның тікелей емес вариантын жасау, бірінші реттік араластырма үлгісін сараптаудағы н?тижелері келтірілген.МКҚЖ вирусы антигенінің сенсибилиздеуші оптимум мөлшері бекітілді, сарысудың оптимум араластырмасы анықталынды, антитүрлік коньюгаттың оптимум араластырмасы таңдалыпалынды. ИФС жүргізу үрдісінде арнайылықты тұмшалаушы реагент таңдалып алынды. Оптикалық тығыздығ бойынша антидененің титрін анықтау мақсатында сызықтық регрессия теңдеуініңпараметрлері анықталып, калибрлік график құрастырылды. Оң ж?не теріс үлгілердің шектік м?ні анықталды. Жасалып шығарылған тест- жүйе ауру ж?не ауырған жануарлардан алынған қансарысуын сараптау барысында сыналды.

Резюме на английском языке:  The article presents the results on the development of the indirect ELISA to detect antibodies against the PPR virus in the blood serum of animals while analyzing samples in one dilution. Theoptimal dose of sensitizing antigen of the virus has been established, the optimal dilution of sera has been determined, optimal breeding anti-specifi c conjugate has been selected. To remove non-specifi cityin the process of performing ELISA, a blocking reagent has been picked up. To determine the titer of antibody in terms of optical density, the parameters of linear regression equation have determined and acalibration graph has been constructed. The threshold meanings of negative and positive samples have been defi ned. A developed test system has been tested while analyzing the samples of blood serum ofthe sick and recovered animals.

Список литературы:  
1. Furley, Taylor W.P., Obi T.U. An outbreak of peste des petits ruminants in a zoological collection. // Vet. Rec., 1987, - Nov. - 7;121(19):443-7.
2. Gibbs E.P.J., Taylor W.P. et al. Classifi cation of peste des petits ruminants virus as the fourth member of the genus Morbillivirus. // Intervirology. - 1979. - v. 11. - N5. - p. 268-274.
3. Орынбаев М.Б., Мамадалиев С.М., Кошеметов Ж.К., Нурабаев С.Ш. Чума мелких жвачных животных в Республике Таджикистан // Международная научно-практическая конференция Актуальные проблемы ветеринарной медицины и сельскохозяйственной биотехнологии. 19-20 мая 2005 г. – Павлодар, 2005. - С. 66-71.
4. Wang Z., et al. Peste des petits ruminants virus in Tibet, China. // Emerg. Infect. Dis. 2009, Feb; 15(2): 299-301.
5. Bao J.Y., et al. Sequence analysis of the nucleocapsid gene and genome promoter region of peste des petits ruminants virus of Chinese origin. // Bing Du Xue Bao. 2008 Nov;24(6):464-71.
6. Taylor W.P. & Abegunde A. The isolation of peste des petits ruminants virus from Nigerian sheep and goats // Res. Vet. Sci., 1979, 26, 94-96.
7. Durojaiye O.A. Precipitating antibody in sera of goats naturally affected with peste des petits ruminants // Trop. Anim. Health Prod., 1982, 14, 98-100.
8. Peste des petits ruminants. Manual of Diagnostic Tests and Vaccines for Terrestrial Animals. (2004). Terrestrial Manual 5th Edition, Chapter 2.1.5.
9. Taylor W.P. Serological studies with the virus of peste des petits ruminants in Nigeria // Res. Vet. Sci., 1979, 26, 236-242.
10. Majiyagbe K.A., Nawathe D.R. & Abegunde A. Rapid diagnosis of PPR infection, application of immuno-electro-osmophoresis (IEOP) technique // Rev. Elev. Med. Vet. Pays trop., 1984, 37(1), 11-15.
11. Durojaiye Detection of the antigen of peste des petits ruminants virus in tissues by indirect immunofl uorescence technique // Nig. Vet. J., 1984, 13, 77-80.
12. Durojaiye O.A., Obi T.U. & Ojo O. Virological and serological diagnosis of peste des petits ruminants // Trop. Vet., 1983, 1, 13-17.
13. Libeau G. et al. Development of a competitive ELISA for detecting antibodies to the peste des petits ruminants virus using a recombinant nucleoprotein // Res. Vet. Sci., 1995, 58, 50-55.
14. Choi K.S., Nah J.J., Ko Y.J., Kang S.Y., Jo N.I. Rapid competitive enzyme-linked immunosorbent assay for detection of antibodies to peste des petits ruminants virus. // Clin. Diagn. Lab. Immunol. 2005, Apr.;12(4):542-7.
15. Saliki J.T. et al. Monoclonal antibody-based blocking enzyme-linked immunosorbent assay for specifi c detection and titration of peste des petits ruminants virus antibody in caprine and ovine sera // J. Clin. Microbiol., 1993, 31(5), 1075-1082.
16. Степанов А.В. и др. Молекулярно-генетический метод диагностики чумы мелких жвачных // Материалы межд. науч.-практ. конф. 15-16 авг. 2000 г. – Покров, 2000.
17. Olaleye O.D., Oyejide A., Ikede B.O. Correlation of humoral immune response with clinical presentation, pulmonary lesions and mortality patterns of goats experimentally infected with peste des petits ruminants virus. // Cytobios. 1989; 57(230-231):141-7.
18. Obi T.U., Ojeh C.K. Dot enzyme immunoassay for visual detection of peste-des-petits-ruminants virus antigen from infected caprine tissues. // J. Clin. Microbiol. 1989, Sep; 27(9):2096-9.
19. Balamurugan V., Singh R.P., Saravanan P., Sen A., Sarkar J., Sahay B., Rasool T.J., Singh R.K. Development of an indirect ELISA for the detection of antibodies against Peste-des-petits-ruminants virus in small ruminants. // Vet. Res. Commun. 2007, Apr; 31(3): 355-64.
20. Crowther, J.R. (1986) Use of enzyme immunoassays in disease diagnosis, with particular reference to rinderpest, In Nuclear and Related Techniques for Improving Productivity of Indigenous Animals in Harsh Environments. International Atomic Energy Agency, Vienna, Austria, pp. 197–210.
21. Hamblin, C. and Crowther, J.R. (1982) A rapid enzyme-linked immunosorbent assay for the serological confi rmation of SVD, in The ELISA: Enzyme-Linked Immunosorbent Assay in Veterinary Research and Diagnosis (Wardley, R.C. and Crowther, J.R., eds.), Martinus Nijhoff, The Netherlands, pp. 232–241.
22. The sero-monitoring of rinderpest throughout Africa. Phase two. Results for 1993. Proceedings of a Research Coordination Meeting of the FAO/IAEA/SIDA/OAU/IBAR/ PARC Coordinated Research Programme organized by the Joint FAO/IAEA Division of Nuclear Techniques in Food and Agriculture, Cairo, Egypt, 7–11, November 1993.
23. Волкова М.А. и др. Непрямой вариант ИФА для количественного определения антител к аденовирусу птиц 1серотипа // Труды федерального центра охраны здоровья животных. - Владимир, 2005. - С. 251-260.
24. Щербаков А.В. и др. Разработка и применение иммуноферментной тест-системы для определения антител к неструктурным белкам вируса ящура // Труды Федерального центра охраны здоровья животных. - Владимир, 2006. – Т.4. – С. 26-39.
25. Тимина А.М. и др. Разработка и применение непрямого варианта ИФА для обнаруженияантител к цирковирусу свиней типа 2 // Труды Федерального центра охраны здоровьяживотных. - Владимир, 2006. – Т.4. – С. 102-115.
26. Avrameas S, Guilbert B. Biologically active water-insoluble protein polymers. Their use for theisolation of specifi cally interacting proteins // Biochemie. 1971;53(5):603–614.

Электронный вариант:  скачать



В статье приводятся результаты по разработке непрямого варианта ИФА для выявления антител против вируса ЧМЖЖ в сыворотках крови животных при анализе проб в одном разведении. Установленаоптимальная сенсибилизирующая доза антигена вируса ЧМЖЖ, определено оптимальное разведение сывороток, подобрано оптимальное разведение антивидового конъюгата. Для снятия неспецифичности в процессе постановки ИФА подобран блокирующий реагент. Для определения титра антител по показателюоптической плотности определены параметры уравнения линейной регрессии и построен калибровочный график. Определены пороговые значения отрицательных и положительных проб. Разработанная тест- система испытана при анализе проб сывороток крови от больных и переболевших животных.

 


Последние Новости

  • 28.11.2012

    Казахстанская общенациональная пробная подписка на IEEE/IET

  • 20.12.2011

    В шаге от цели «Smart»

  • 20.12.2011

    Инновационный прорыв региона

Форма Авторизации

ВойтиВойти
  • Забыли пароль?